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PCR基因擴增儀對樣品的收集和擴增環(huán)節(jié)操作要求

更新時間:2019-12-05      點擊次數(shù):2266
   PCR基因擴增儀是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應(yīng)組成一個周期,循環(huán)進行,使目的DNA得以迅速擴增,具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。
  PCR基因擴增儀檢測微量感染因子時,操作人員容易因為污染而導(dǎo)致各種問題。SLD中檢實驗室技術(shù)根據(jù)多年行業(yè)經(jīng)驗,給出的建議是:進行PCR操作時,操作人員一定要嚴格遵守一些操作規(guī)程,大程度地降低可能出現(xiàn)的PCR污染事故的發(fā)生。 
  盡管PCR擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應(yīng)導(dǎo)致的,但樣品間的交叉污染也是常見原因之一。因此,不僅要在進行擴增反應(yīng)時要謹慎對待,在樣品的收集、抽提和擴增的所有環(huán)節(jié)都應(yīng)謹慎操作,一般需做到以下幾點: 
  1、戴一次性手套,若不小心濺上反應(yīng)液,應(yīng)立即更換手套; 
  2、避免反應(yīng)液飛濺,若不小心濺到手套或桌面上,應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面; 
  3、使用一次性吸頭,嚴禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用,吸頭不要長時間暴露于空氣中,避免空氣中氣溶膠的污染; 
  4、操作多份樣品時,制備反應(yīng)混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后再分裝,這樣既可以減少操作次數(shù),避免污染,又可以增加反應(yīng)的精確度; 
  5、后加入反應(yīng)模板,加入后蓋緊反應(yīng)管; 
  6、操作時設(shè)立空白對照和陰陽性對照,既可驗證PCR反應(yīng)的可靠性,又可
  以協(xié)助判斷擴增系統(tǒng)的可信性; 
  7、由于實際操作時加樣器很容易受產(chǎn)物氣溶膠或標本DNA的污染,所以操作者應(yīng)該使用高壓處理過的或可替換的加樣器。假如沒有這種特殊的加樣器,至少在PCR操作過程中加樣器應(yīng)該,嚴禁交叉使用,尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個相鄰區(qū)域使用; 
  8、重復(fù)實驗,驗證結(jié)果,慎下結(jié)論。 
  由于PCR實驗操作非常專業(yè),在設(shè)計PCR基因擴增實驗室時設(shè)計師也要充分考慮上述技術(shù)要求,避免PCR實驗室在后續(xù)使用時出現(xiàn)返工、返修問題。
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